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微生物基因組DNA序列標(biāo)準(zhǔn)RM 8375旨在用于微生物全基因組測(cè)序的驗(yàn)證、優(yōu)化、過(guò)程評(píng)估和性能評(píng)估。特別注意評(píng)估基因組序列。該材料旨在幫助評(píng)估高通量微生物 DNA 測(cè)序方法的性能。該基因組 DNA 已從細(xì)胞培養(yǎng)物中提取。因?yàn)?RM 是提取的 DNA,所以它不評(píng)估 DNA 提取等分析前步驟。然而,它確實(shí)對(duì)測(cè)序文庫(kù)制備、測(cè)序機(jī)器、堿基調(diào)用算法和隨后的生物信息學(xué)分析提出了挑戰(zhàn)。微生物基因組DNA序列標(biāo)準(zhǔn)RM 8375并非旨在評(píng)估其他生物信息學(xué)步驟,例如菌株鑒定、系統(tǒng)發(fā)育分析或基因組注釋。基因組 DNA 的純度被評(píng)估為適合這些目的。
微生物基因組DNA序列標(biāo)準(zhǔn)RM 8375的一個(gè)單元由四個(gè)小瓶組成。每個(gè)小瓶包含不同的微生物基因組 DNA 樣本(MG-001 鼠傷寒沙門氏菌 LT2、MG-002 金黃色葡萄球菌、MG-003 銅綠假單胞菌和 MG-004 產(chǎn)孢梭菌)。
微生物基因組DNA歸納起來(lái)主要有如下特點(diǎn):
一. 原核生物基因組較小,DNA 分子由環(huán)狀雙鏈或鏈狀 DNA 分子組成。 原核生物基因組結(jié)構(gòu)緊密, 基因間隔序列很少, 蛋白質(zhì)編碼序列在基因組中所占的比例很高(75%~90%), 基因常以操縱子形式存在, 其中的結(jié)構(gòu)基因?yàn)槎囗樂(lè)醋印?原核生物基因結(jié)構(gòu)比較簡(jiǎn)單,蛋白質(zhì)編碼基因是從起始密碼子開始到終止 密碼子結(jié)束,長(zhǎng)度為 3 的整數(shù)倍的一段連續(xù)的 DNA 片段。
二. 除少數(shù)幾個(gè)物種外(主要是古細(xì)菌),原核生物的基因是一段連續(xù)的 DNA 序列,基因組中幾乎 沒(méi)有斷裂基因。在大多數(shù)情況下,編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因在細(xì)胞染色體中是單拷貝的,但編碼 rRNA 的 基因往往是多拷貝的。
三. 原核生物基因組中存在重復(fù)序列(repeat sequences)。但是存在一些可以在基因組中移動(dòng),并可 在生物體之間轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)座元件(transposable elements),如插入序列(insertion sequences)等,在基因或操縱 子的終點(diǎn)往往具有特殊的終止序列,可導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄終止和 RNA 聚合酶從 DNA 鏈上脫落。原核生物基因 組結(jié)構(gòu)(如圖 2.5 所示)。
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