ERM-AD624 李斯特菌單核細(xì)胞基因瓊脂糖插頭每個(gè)單元包括一個(gè)小瓶，包含一個(gè)瓊脂糖塞，為PFGE嵌入未消化的單核增生李斯特菌DNA。這些插頭是由歐盟委員會(huì)的聯(lián)合研究中心負(fù)責(zé)生產(chǎn)和認(rèn)證的。以單核增生李斯特菌H2446作為生產(chǎn)塞的起始原料。這些插塞儲(chǔ)存在含有TRIS-EDTA緩沖溶液的微瓶中。

使用說(shuō)明

ERM-AD624 李斯特菌單核細(xì)胞基因瓊脂糖插頭用于質(zhì)量控制和/或方法性能評(píng)估。與任何參考材料一樣，它可以用于建立控制圖或驗(yàn)證研究。請(qǐng)注意，該材料的認(rèn)證值是使用如下所述的PFGE李斯特菌協(xié)議獲得的。遵循不同的PFGE協(xié)議可能會(huì)產(chǎn)生不同的頻帶模式，從而產(chǎn)生不同的結(jié)果。

限制前孵育

-將塞放于100µL 1倍濃縮限制性內(nèi)切酶(RE)緩沖溶液中，37±1°C孵育10 min。

消化瓊脂糖塞

-抽吸RE緩沖液，加入含有5個(gè)單位AscI酶的100µL RE緩沖液，確保塞*浸泡。-在37±1°C的干浴中孵育4小時(shí)。

PFGE消化片段

-將0.5x TBE緩沖溶液(44.5mM三硼酸鹽；1mMEDTA，pH 8.3)倒入電泳室，打開(kāi)蠕動(dòng)泵，將冷水機(jī)設(shè)置為14°C。-用0.5x TBE制備1%(w/v)海帶金瓊脂糖(SKG)瓊脂糖，并保持在50oC直到使用。-吸入酶溶液，在試管中加入200µL 0.5x TBE，室溫孵育5 min。-將梳子放在臺(tái)頂，并將塞子裝入梳子齒的底部。-將塞子放在梳子上干燥3 min，用一滴1%(w/v)SKG瓊脂糖溶液密封。-將梳子放置在凝膠托盤(pán)中，以確保插頭的下邊緣正確地與框架對(duì)齊。-將瓊脂糖溶液小心地倒入凝膠托盤(pán)中，讓凝膠凝固30 min。-取出梳子，用1%(w/v)SKG瓊脂糖溶液填充孔，并使其凝固。

儲(chǔ)存

ERM-AD624 李斯特菌單核細(xì)胞基因 瓊脂糖插頭材料應(yīng)儲(chǔ)存在4±3°C。然而，歐洲委員會(huì)不能對(duì)材料在客戶的場(chǎng)所儲(chǔ)存期間發(fā)生的變化負(fù)責(zé)，特別是對(duì)打開(kāi)的樣品。

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